蝗蟲(chóng)基因組DNA提取及保存方法

1.供試昆蟲(chóng)本試驗研究的昆蟲(chóng)樣本為亞洲小車(chē)蝗（Oedaleusasiaticus）成蟲(chóng)，均采自?xún)让晒佩a林郭勒盟多倫縣農牧交錯區草原，用養蟲(chóng)籠活體帶回實(shí)驗室進(jìn)行處理保存。

2.液氮速凍處理取10頭活的亞洲小車(chē)蝗單頭裝入離心管中，將離心管放入液氮中速凍處理3min，取出后在室溫條件下放置12h觀(guān)察亞洲小車(chē)蝗存活情況。自增壓液氮罐

3.樣本保存方法

（1）液氮速凍后保存將采集帶回實(shí)驗室的活體蝗蟲(chóng)樣本單頭裝入離心管中，將離心管放入液氮中速凍處理3min，取出后放入-40℃冰箱中保存備用。

（2）直接冷凍保存將采集帶回實(shí)驗室的活體蝗蟲(chóng)樣本單頭裝入離心管中，直接放入-40℃冰箱中保存備用。

（3）乙醇保存將采集帶回實(shí)驗室的活體蝗蟲(chóng)樣本放入無(wú)水乙醇（分析純）中保存備用。

（4）干制標本 將采集帶回來(lái)的活體亞洲小車(chē)蝗樣本放入毒瓶中毒死后，針插保存于標本室中，待風(fēng)干后進(jìn)行DNA提取試驗。

4.DNA的提取將上述4種方法保存的蝗蟲(chóng)樣本在3個(gè)月后進(jìn)行DNA提取試驗。分別選用單頭亞洲小車(chē)蝗的后足股節，無(wú)水乙醇（分析純）保存的蝗蟲(chóng)后足股節需在提取之前先用無(wú)菌去離子水沖洗2～3次，將蝗蟲(chóng)股節放入研缽中用液氮研磨成粉并移入1.5mL離心管中，然后使用天根dp304動(dòng)物基因組DNA提取試劑盒參照說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行基因組DNA提取。

5.DNA電泳檢測用1%的瓊脂糖凝膠電泳對提取的蝗蟲(chóng)基因組DNA進(jìn)行檢測。取DNA樣品3μL、上樣緩沖液2μL混勻后加入凝膠時(shí)預留的點(diǎn)樣孔中，加入DL2000Marker（TaKaRa；第3條帶為150ng/μL），經(jīng)過(guò)100V恒壓電泳20min，使用紫外凝膠成像系統觀(guān)察基因組DNA提取情況并拍照保存。自增壓液氮罐