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超低溫保存應用:適應于一系列細胞、組織和有機體(例如細菌、酵母、血紅細胞、雜交瘤、哺乳動(dòng)物配子和高等植物培養細胞),并且已成功地開(kāi)發(fā)其商業(yè)價(jià)值,特別是牛精zi和胚胎,以及近的軟體動(dòng)物幼體。冰凍配子和胚胎在人類(lèi)生育管理上的作用也變得越來(lái)越重要了。自增壓液氮罐
冰凍和解凍對大多數細胞都是嚴重的脅迫,通過(guò)控制冷凍和解凍的速度、以及改變細胞和細胞質(zhì)的化學(xué)環(huán)境來(lái)改變。冰凍配子和胚胎在人類(lèi)生育管理上的越來(lái)越重要。了解超低溫保存的注意事項:
在冰凍過(guò)程中,主要的脅迫來(lái)自:①暴露在低溫下;②冰晶的機械、物理效應;③胞外溶液性質(zhì)的改變;④胞內溶液類(lèi)似性質(zhì)的改變。
超低溫損傷的一個(gè)原因,可能是細胞本身沒(méi)有結冰時(shí)溫度下降對細胞結構和功能的影響。若發(fā)生這種直接的低溫損傷,則在降溫過(guò)程中會(huì )很快地表現出來(lái)并取決于冷凍速度,隨冷凍速度增加而增加。這種損傷在很多細胞包括細菌、酵母、原生生物、藻類(lèi)、高等植物和哺乳類(lèi)細胞系中都可觀(guān)察到。
在水溶液環(huán)境的細胞系統中,冷凍速度慢將導致胞外結冰,而細胞仍未結冰,不過(guò)已處于超冷卻狀態(tài)(即處于溶液冰點(diǎn)以下,但無(wú)冰晶形成)。胞外結冰的主要后果是溶質(zhì)從冰晶中排出,并在剩余的液體部分積累。這小部分溶液很快積累大量溶質(zhì),因而對細胞造成了高滲環(huán)境,以致未結冰細胞的滲透脅迫也就增加 (圖1)。細胞的反應表現為失水、體積減少,并且因細胞膜的表面積減少可能遭受一系列機械損傷。這些損傷包括由于細胞收縮引起質(zhì)膜物質(zhì)丟失,這可能導致解凍過(guò)程中隨著(zhù)細胞恢復其原來(lái)的體積而發(fā)生胞溶作用。顯然,在這種低溫脫水過(guò)程中,未冰凍細胞的細胞質(zhì)將更加濃縮,其細胞器將和整體細胞一樣遭受后面損傷性的滲透脅迫效應。細胞外的冰晶和未結冰溶液將同時(shí)存在,直至達到溶液的共溶溫度,在這種溫度下,溶質(zhì)開(kāi)始晶體化。自增壓液氮罐